蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA检测方法的建立

作者：刘河冰; 秦誉; 邢维维; 马立才^*

来源：食品工业科技, 2022, 43(05): 294-301.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2021060279

• 蘑菇
• 鹅膏毒肽
• 间接竞争酶联免疫吸附测定法

目的：旨在建立一种检测蘑菇中鹅膏毒肽（Amanitin, AMA）的间接竞争酶联免疫吸附方法（Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay, ic-ELISA）。方法：通过EDC/NHS在α-鹅膏毒肽的羧基位置引入6-氨基己酸得到半抗原，并进一步与不同的载体蛋白偶联制备免疫原和包被原。之后，利用免疫原免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。基于所获得的抗体，并通过对包被原和抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标二抗工作浓度和孵育时间等条件的优化，建立了蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA检测方法，最后对所建立方法的灵敏度、添加回收率、批内及批间变异等参数进行了评价。结果：合成的半抗原分子量为1033.12，经MALDI-TOF鉴定免疫原的偶联比约为10.03。基于杂交瘤技术制备、筛选出鼠单克隆抗体13H4的IC50为1.91μg/L。基于所获得单克隆抗体，所建立蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA方法的检出限为0.88μg/kg，添加回收率为85.66%～113.05%，批内变异系数为5.35%～9.54%，批间变异系数小于15%。结论：本研究所建立的ic-ELISA方法准确度、精密度、灵敏度较高、性能稳定，为突发毒蘑菇中毒事件的毒原分析提供了一种简便、可靠的快速检测方法。

• 单位
  北京维德维康生物技术有限公司