筇竹CBF1基因的原核表达和多克隆抗体的制备

作者：肖艳; 林华; 杨丽娟; 陈世界; 熊泽平; 陈其兵

来源：园艺学报, 2014, 41(02): 375-381.

DOI：10.16420/j.issn.0513-353x.2014.02.029

• 筇竹
• CBF1
• 原核表达
• 抗血清制备

以筇竹(Qiongzhuea tumidinoda Hsueh et Yi)叶片为试材,采用RT-PCR方法克隆其CBF1基因,并将CBF1连接到原核表达载体pET32a(+)上,经克隆测序确定所构建的重组载体pET32-QZ开放阅读框正确。将重组载体pET32-QZ转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,证明CBF1蛋白得到了高效表达,所表达蛋白是大小约为45 kD的融合蛋白。经镍柱纯化后作为抗原免疫家兔,制备CBF1蛋白特异性抗血清。所制备的多克隆抗体能够与融合蛋白和经冷诱导的筇竹叶片总蛋白在25 kD处出现杂交条带。上述结果表明,表达的目的蛋白可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测。

• 单位
  四川出入境检验检疫局; 四川农业大学