ILP-2-ECM1(P85)促进乳腺癌细胞的生长

作者：王思源; 向思琦; 王雅妮; 朱林; 朱柳; 向明钧^*

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2019, 35(09): 996-1005.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.09.10

• 凋亡抑制蛋白-2
• 细胞外基质蛋白1
• 乳腺癌细胞MCF-7

凋亡抑制蛋白-2(inhibitor of apoptosis protein-like protein-2,ILP-2)是新发现的凋亡抑制蛋白质,其抑制肿瘤细胞凋亡促进其生长的分子机制有待阐明,而细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)所介导的信号通路与肿瘤细胞的生长密切相关。本研究通过免疫共沉淀法,检测到乳腺癌MCF-7细胞中ILP-2与ECM1(P85)存在相互作用。分别用化学合成的ILP-2-siRNA及ECM1-siRNA干扰处理MCF-7细胞。以未转染的MCF-7细胞和转染阴性对照siRNA的细胞分别作为空白和阴性对照,利用蛋白质印迹法,检测ILP-2-siRNA干扰后ECM1、FAK、Akt蛋白的表达,以及ECM1-siRNA干扰后ILP-2蛋白的表达。其结果显示,与空白对照组相比,ILP-2-siRNA-5(0. 32±0. 095)及ECM1-siRNA-1 (0. 42±0. 024)干扰效率较高(均P<0. 001); ILP-2-siRNA-5组待测蛋白质的相对表达量均显著下调(ECM1,0. 19±0. 013,P<0. 001),FAK (0. 64±0. 069,P<0. 01),Akt (0. 35±0. 120,P<0. 01)),ECM1-siRNA-1组ILP-2 (0. 48±0. 060)蛋白表达也显著下调,表明ILP-2与ECM1-mTOR信号通路联系密切。分别在ILP-2-siRNA和ECM1-siRNA转染24、48和72 h时,使用CCK-8法检测乳腺癌细胞的增殖,并用TUNEL标记荧光法和吖啶橙/溴化乙啶双荧光染色法(AO/EB)检测其凋亡。结果显示,与空白对照组相比,ILP-2-siRNA-5组和ECM1-siRNA-1组的存活率均显著下降(P<0. 001),凋亡率均明显升高(P<0. 001)。利用共转染技术同时敲低ILP-2和ECM1表达,检测细胞的凋亡情况。结果显示,在干扰处理后24 h(0. 55±0. 122),48 h(0. 80±0. 107)和72h(0. 73±0. 091)的凋亡率显著均高于阴性对照组(P <0. 05)。但与只敲低ILP-2或ECM1相比,无显著性差异(P>0. 05)。表明ILP-2可能是通过与ECM1作用激活FAK-mTOR信号通路,影响MCF-7细胞的增殖和凋亡,对乳腺癌细胞MCF-7的生长发挥了积极的作用。

• 单位
  中南大学; 生命科学学院; 北方民族大学; 吉首大学