摘要
为研究肠炎沙门氏菌非编码小RNA Inv R对肠炎沙门氏菌致病性的作用,本研究克隆了肠炎沙门氏菌50336菌株inv R基因,通过λ-Red同源重组系统构建了inv R缺失突变株,并利用表达载体p BR322构建了回补株。采用比浊法测定了50336野生株,inv R缺失株和回补株的生长曲线,结果显示inv R的缺失不影响细菌的生长。通过细胞黏附实验检测了上述3种菌株对人结肠癌细胞系Caco-2的黏附性,结果显示,与野生株相比,inv R突变株对Caco-2细胞黏附能力有所增强,回补株黏附能力下降。将3种菌株分别感染1日龄雏鸡,检测雏鸡感染3种菌株后的发病与死亡情况、细菌在各脏器内的分布以及对雏鸡的半数致死量(LD50),结果显示,3株菌感染后均可引起雏鸡腹泻、内脏器官损伤等症状,严重者导致死亡;感染鸡心、肝、脾、肺、肾、小肠和盲肠均可分离到对应的细菌;野生株,inv R缺失株和回补株对雏鸡的LD50分别为9.47×107cfu,4.72×107cfu和7.50×107cfu,表明inv R基因的缺失增强了肠炎沙门氏菌的毒力,但与野生株相比,差异不显著。本研究首次证明了Inv R与肠炎沙门氏菌对宿主细胞的黏附和对易感动物的致病性密切相关,为Inv R毒力调控机制的研究提供了实验依据。
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单位江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 扬州大学; 北京农业职业学院