山羊地方性鼻内肿瘤病毒MAb的制备及间接ELISA方法的建立

作者：江锦秀; 林裕胜; 张靖鹏; 游伟; 张龙; 毛坤明; 胡奇林^*

来源：中国预防兽医学报, 2023, 45(01): 45-50.

• 山羊地方性鼻内肿瘤病毒
• 单克隆抗体
• 间接ELISA

为建立检测山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)的间接ELISA方法，本研究以纯化的ENTV-2免疫BALB/c小鼠，采用间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆，经3次克隆纯化后获得1株能够稳定分泌ENTV-2特异性单克隆抗体(MAb)的细胞株，命名为6E4，并采用鼠MAb亚类鉴定试剂盒鉴定6E4 MAb的亚类，结果显示，MAb 6E4的亚类为κ链、Ig G1亚型。进一步以6E4为检测抗体，经各反应条件的优化建立了检测鼻液样品中ENTV-2的间接ELISA方法，该方法的临界值为0.323。利用该方法 检测羊口疮病毒(ORFV)、绵羊肺炎支原体(Movi)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)以及纯化的ENTV-2和ENTV-2患病羊鼻液样品，结果显示，除纯化的ENTV-2及ENTV-2患病羊鼻液样品的检测结果呈阳性外，ORFV、Movi、Mmc的检测结果均为阴性，该方法特异性较强。将纯化的ENTV-2 (以蛋白浓度换算) 2倍倍比稀释(20μg/mL～0.08μg/mL)后，利用建立的间接ELISA方法检测，结果显示，纯化的ENTV-2稀释至0.3125μg/mL时检测结果仍可判定为阳性，该方法敏感性较高。批内、批间重复性试验结果显示，二者变异系数均小于10%，该方法重复性较好。采用荧光定量RT-PCR方法和本实验建立的间接ELISA方法检测109份临床鼻液样品，比较二者之间的符合率，结果显示，该间接ELISA方法与本研究室前期建立的荧光定量RT-PCR的检测结果符合率达94.5%，表明本研究建立的间接ELISA方法可用于ENTV-2感染的临床快速检测。本研究建立的ENTV-2间接ELISA方法为ENT的净化提供了技术手段。

• 单位
  动物科学学院; 福建农林大学; 福建省农业科学院