竹叶花椒提取物抑制大鼠肝细胞BRL 3A自噬而诱导ROS累积

作者：黄艳; 蒋佳洛; 杨南楠; 郭家富; 张建; 饶朝龙^*

来源：医药导报, 2023, 42(10): 1436-1442.

• 竹叶花椒
• 肝细胞
• 自噬
• 活性氧

目的 研究竹叶花椒甲醇提取物(ZADCM)对BRL 3A细胞自噬水平与活性氧(ROS)生成量的影响。方法 体外培养BRL 3A细胞，将其与ZADCM(70μg·mL-1)处理3、6、12、24 h或不同浓度的ZADCM(30、50、70μg·mL-1)孵育24 h,干预给药用3-甲基腺嘌呤(10 mmol·L-1)、二甲双胍(2.5 mmol·L-1)处理；采用CCK-8法检测BRL 3A细胞存活率，流式细胞术检测BRL 3A细胞内ROS生成量，免疫荧光法观察自噬标志性蛋白LC3B的荧光强度，Western blotting检测p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1、Beclin-1和LC3B蛋白的表达。结果 不同浓度ZADCM处理24 h后，与正常对照组比较，免疫荧光结果显示LC3B荧光强度降低；ZADCM(70μg·mL-1)处理12或24 h后，Western blotting结果显示，LC3B和Beclin-1蛋白表达水平均降低(P<0.05或P<0.01),p-mTOR2448/mTOR、p-ULK1757/ULK1均显著升高(P<0.05)。激光共聚焦结果显示ROS灶点增加，且流式细胞术结果显示，药物处理组的ROS水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);采用3-甲基腺嘌呤或二甲双胍干预后，与药物处理组比较，细胞内ROS升高或降低，自噬相关蛋白表达降低或升高，ZADCM组BRL 3A细胞存活率降低或升高。结论 ZADCM可能通过激活BRL 3A细胞内mTOR/ULK1信号通路，抑制细胞自噬，并伴随ROS累积，引起细胞活力下降。

• 单位
  成都中医药大学; 公共卫生学院