乙型肝炎病毒3022～1787核苷酸缺失突变体编码蛋白具有抗α干扰素作用

作者：王林; 郭丹华; 焦伯延; 林万松; 林建银; 林旭

来源：微生物与感染, 2009, 4(01): 4-8+21.

DOI：10.3969/j.issn.1673-6184.2009.01.002

• 乙型肝炎病毒
• 末端蛋白
• 缺失突变
• α干扰素

为证实乙型肝炎病毒(HBV)3022～1787核苷酸缺失突变体编码蛋白TS′X′(源于DNA聚合酶读码框架,T为TP区,S′为部分缺失的spacer区,X′为截短的X蛋白)具有抗α干扰素(IFN-α)作用并确定其功能区域,用聚合酶链反应(PCR)扩增获得TS′X′全长及片段TS′(含TP区及部分缺失的spacer区),并克隆于pcDNA3.1/HisC载体。重组质粒以FuGENE6转染Huh7肝细胞,48h后裂解细胞,以蛋白质印迹法(Western blot)证实目的蛋白可在Huh7肝细胞中表达。重组质粒及空载体pcDNA3.1/HisC分别与IFN-α反应报告质粒p6-16CAT按分子数5∶1、10∶1、15∶1、30∶1共转染Huh7肝细胞,转染后48h给予终浓度为100IU/ml的IFN-α2a刺激,作用24h后裂解细胞,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胞内氯霉素乙酰基转移酶(CAT)含量。结果显示,与空白载体相比,随着TS′X′及TS′重组表达质粒转染量的递增,Huh7胞内CAT值逐渐降低(n=6,P<0.05),但TS′X′与TS′之间无显著差异(n=6,P>0.05)。本研究证实,HBV3022～1787核苷酸缺失突变体编码的TS′X′蛋白可抑制Huh7细胞对IFN-α的反应性,其活性与其N端TP及部分缺失的spacer区有关。

• 单位
  福建医科大学