蓝莓多酚氧化酶的部分纯化及其酶学特性研究

作者：杨广; 江凯; 曹少谦; 刘亮^*

来源：食品安全质量检测学报, 2021, 12(13): 5403-5408.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2021.13.045

• 蓝莓
• 多酚氧化酶
• 纯化
• 酶学特性

目的探究蓝莓多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的酶学特性。方法分别采用硫酸铵分级沉淀法和疏水层析法分离纯化蓝莓PPO,比较2者的纯化效果,并探究蓝莓PPO的酶促反应动力学、最适反应温度、pH及稳定性。结果硫酸铵分级沉淀法与疏水层析法的纯化倍数相近,但2者的得率分别为61%和84%。以绿原酸和邻苯二酚为底物时,蓝莓PPO的米氏常数(Km)分别为23.38mmol/L和6.13mmol/L。该酶的最适pH为6.0,最适反应温度为25℃。该酶在40℃以上不稳定,在70℃时,其酶活在60 s后残余酶活仅为7.23%。随着pH的不断降低,其稳定性不断下降。结论相比于硫酸铵分级沉淀法,疏水层析法对蓝莓PPO的分离纯化效果更好,蓝莓PPO对邻苯二酚的亲和力更高,该酶对温度和pH都较敏感。

• 单位
  浙江医药高等专科学校; 浙江万里学院