宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2的相互作用及其对病毒复制的影响

作者：王亚楠; 韩露露; 孙傲颖; 姜艳平; 崔文; 乔薪瑗; 唐丽杰; 徐义刚; 李一经; 王丽^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2020, (21): 1-175.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2020.02.0030

• 猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus, TGEV)
• 热休克蛋白70-2(HSPA2)
• 蛋白互作
• 病毒复制
• 免疫共沉淀(Co-IP)
• 真核表达

为了探究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主细胞热休克蛋白70-2(HSPA2)的相互作用,以及HSPA2表达对TGEV复制的影响,试验利用RT-PCR方法获得猪源HSPA2基因并构建其真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2,通过Western-blot和间接免疫荧光试验检测真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2在IPEC-J2细胞中的表达情况。利用免疫共沉淀(Co-IP)和共定位试验进一步验证TGEV Nsp2和宿主细胞蛋白HSPA2之间是否存在相互作用,利用基因过表达技术在IPEC-J2细胞中过表达HSPA2后接种TGEV,分别测定接种后36,48小时时病毒TCID50。结果表明:真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2能够在IPEC-J2细胞中成功表达,HSPA2与Nsp2之间存在相互作用,并且HSPA2表达量升高后TGEV的TCID50略有升高。说明宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2之间存在相互作用,且HSPA2的表达对TGEV复制具有一定促进作用。

• 单位
  东北农业大学; 动物科学学院