sPD-L1蛋白原核表达、纯化及鉴定

作者：鲁友铭; 吴胜昔^*; 侯力嘉; 王桂玲; 马培杰; 卢琬薪

来源：重庆理工大学学报：自然科学, 2020, 34(11): 199-206.

• 可溶性程序性死亡因子配体1
• 原核表达
• 镍柱纯化
• 蛋白免疫印迹
• 酶联免疫吸附试验

为实现人可溶性程序性死亡因子配体1(soluble programmed death ligand-1,sPDL1)在原核表达系统的高效表达,根据GenBank发表的sPD-L1(GenBank登录号:AY254342.1)基因序列,在不改变sPD-L蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,化学合成PD-L1胞外域基因全长序列,克隆至质粒载体p ET28a(+),转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)进行诱导表达,利用镍柱对目的蛋白进行纯化。纯化后的目的蛋白经SDSPAGE电泳、蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附试验进行生物特性鉴定。结果表明:重组质粒经过Nco I、Xhol I双酶切鉴定显示在668 bp处有一条特异性条带,与预期相符;当诱导条件为0.5mmol/L IPTG、37℃、9 h时,重组蛋白具有最高表达量。纯化产物经过Western blot鉴定,结果显示在28 KD左右有明显蛋白条带出现,而空白对照组则无条带。ELISA鉴定结果显示其可以与进口小鼠抗人PD-L1单克隆抗体发生较强的反应,说明已成功实现了在大肠杆菌中高效表达sPD-L1重组蛋白,可为后续开展sPD-L1检测方法的研究奠定基础。

• 单位
  生物工程学院; 重庆理工大学