稳定表达CD19的HeLa细胞株的构建及其作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞功能鉴定

作者：敖罗权; 敖翔; 郭韡; 邢伟; 胡雪停; 李战; 姚孟维; 吴晓凤; 徐祥^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2020, 36(12): 1095-1101.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009114

• CD19
• HeLa细胞
• 嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞
• 慢病毒
• 实体肿瘤

目的构建稳定表达CD19的HeLa细胞株并鉴定其作为CD19嵌合抗原受体T(CD19-CAR-T)细胞的靶细胞功能。方法以NCBI中人CD19基因序列为模板,设计并合成引物,从Raji细胞中扩增CD19;酶切回收CD19片段和慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,并行重组反应;重组载体pLVX-CD19-IRES-Puro基因测序;载体质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,收集浓缩慢病毒,稀释计数法测定滴度;慢病毒感染HeLa细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达株,实时定量PCR和流式细胞术检测CD19表达; CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养, ELISA检测培养上清中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。结果插入重组载体中的CD19序列无误;获得滴度为1×108转导单位(TU)/mL的CD19过表达慢病毒;在筛选所得的稳定表达株中, CD19的mRNA表达水平和膜蛋白表达水平显著高于对照组HeLa细胞; CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养后, IL-2、 IFN-γ以及TNF-α分泌显著增加。结论稳定表达CD19的HeLa细胞株构建成功,且能作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞。

• 单位
  大坪医院; 中国人民解放军陆军军医大学