Ⅳ型禽腺病毒Fiber-2(knob)蛋白的表达及免疫效力评价

作者：程慧敏; 刘小晓; 林健; 刘立新; 赵际成; 段会娟; 王小蕾; 范维; 刘月焕; 钱泓^*; 张强^*; 杨志远^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(02): 218-222.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.02.03

• Ⅳ型禽腺病毒
• Fiber-2蛋白
• 亚单位疫苗
• 免疫效力

表达Ⅰ群Ⅳ型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2(knob)蛋白，以制备Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗并对其免疫效力进行评价。将FAdV-4 Fiber-2的knob基因克隆至原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-Fiber-2(knob)。将重组质粒转化至大肠杆菌BL-21(DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达，采用镍离子亲和层析柱纯化，SDS-PAGE检测纯化后的目的蛋白。将蛋白抗原与佐剂1∶3乳化，分组免疫100,50,25,0 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗，攻毒剂量为104.5 ELD50/只，免疫后24 d攻毒，比较不同免疫剂量攻毒保护效果。又制备4批蛋白含量为24 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗，比较不同批次间免疫效力差异。结果显示，成功构建pET28a-Fiber-2(knob)重组质粒，纯化后的蛋白纯度达到90%,质量浓度为3 269 mg/L。当攻毒剂量为104.5 ELD50时，FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗攻毒保护率可达到100%(免疫蛋白抗原量为25～100μg/只),当攻毒剂量为5×103.9 ELD50时，最小免疫蛋白抗原含量为14.4μg/只时也可产生100%保护。不同批次间FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗均能刺激机体产生抗体，有效保护SPF鸡抵御FAdV强毒攻击，具有良好的免疫保护效力。

• 单位
  北京市农林科学院; 浙江理工大学