利用CRISPR/Cas9系统构建Prdx6基因敲除的RAW264.7细胞系

作者：翟菲菲; 全芷仪; 王路鹿; 张士军; 鞠丹迪; 水一鸣; 常江; 常恒祯; 胡盼; 李岩松; 卢士英; 周玉; 柳增善; 李兆辉^*; 任洪林^*

来源：动物医学进展, 2019, 40(04): 36-40.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.04.007

• CRISPR/Cas9
• RAW264.7
• Prdx6
• 移码突变
• 布鲁菌

利用CRISPR/Cas9系统构建敲除Prdx6基因的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,为探讨Prdx6与布鲁菌感染及胞内寄生的关系构建细胞模型。针对Prdx6基因的第1外显子设计sgRNA,构建重组表达载体Prdx6-pX459-sgRNA,将重组质粒转染RAW264.7细胞,嘌呤霉素初步筛选。单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。结果表明,在敲除细胞株基因组中存在碱基缺失,导致移码突变。说明成功获得敲除Prdx6基因的RAW264.7细胞系。

• 单位
  吉林大学