我国丙肝病毒结构区的cDNA克隆

作者：祁欣; 贾文祥; 杨春; 杨远; 曾蔚; 陈恬

来源：药品评价, 2004, (01): 29-33.

DOI：10.3969/j.issn.1672-2809.2004.01.006

• 肝炎病毒,丙型
• 基因结构,病毒
• 病毒蛋白质类
• 克隆,分子
• 序列分析

目的克隆我国西部丙型肝炎病毒全部结构区基因并进行序列分析,为研究丙肝病毒和基因工程表达做准备。方法从1名西安市丙肝感染者血液中,用Trizol试剂裂解HCV病毒颗粒,用糖原与RNA共沉淀提取HCVRNA,用AMV逆转录酶和随机引物逆转录为cDNA,用RT-PCR方法扩增目的片段并转化到pGEM-T质粒,得到pGEM-T-HCVc,pGEM-T-HCVe1和pGEM-T-HCVe2克隆。将以上3个克隆用特定的酶降解,用连结酶进行连接,构建了HCV结构区的完整克隆。结果将克隆好的质粒从两端双向测序,得到完整的HCV结构基因cDNA核苷酸序列,总长度为2238bp,与已发表的HCV序列长度一致,未发现缺失或移码突变,序列中间亦未发现转录终止子。本文序列与HCV1a,1b序列核苷酸的同源性分别为91.8%,84.5%。氨基酸的同源性分别为94.2%,86.3%。本文序列与HCV1a核苷酸及氨基酸的同源性均大于90%,应为HCV1a亚型。结论我国西部地区存在HCV1a亚型,所克隆HCV结构区cDNA克隆可以用于丙肝病毒研究和基因工程表达。

• 单位
  华西医学中心; 四川大学