脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA方法建立

作者：孙亚宁; 李青梅; 杨苏珍; 胡骁飞; 杨继飞; 张颖硕; 陈琳琳; 邢云瑞; 邓瑞广; 张改平^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(04): 689-696.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.04.10

• 脱氧雪腐镰刀菌烯醇
• 免疫程序
• 单克隆抗体
• 酶联免疫吸附测定

为了快速准确地检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)污染、控制其危害,本研究制备了高灵敏度的DON单克隆抗体,并建立了间接竞争酶联免疫吸附(ELISA)快速检测方法。采用N,N′-羰基二咪唑(N,N′-Carbonyldiimidazole, CDI)一步法将DON与载体蛋白BSA及OVA偶联制备人工抗原。用DON-BSA免疫小鼠,并根据免疫效果在常规免疫方案中增加腹腔免疫进行改进,利用细胞融合技术,获得能稳定分泌DON单克隆抗体的杂交瘤细胞株1株2A3-E11。经鉴定该细胞株分泌的DON抗体为IgG1型,效价达1∶1.024×106,IC50为21.507 9μg/L,亲和力可达9.064×108 mol/L;与15-AcDON有233.7%的交叉反应,与其他结构类似物及常见真菌毒素未见明显交叉反应。基于该抗体建立的间接竞争ELISA检测方法检测范围为4.696 8～98.490 0μg/L,小麦样品中的加标回收率为90.509%～116.016%,变异系数为3.081%～7.928%。研制的间接竞争ELISA检测方法灵敏度高、结果可靠,可进一步应用于小麦等谷物样品中DON污染的检测,为DON的免疫学检测技术研发奠定基础。

• 单位
  河南省农业科学院; 河南农业大学