华支睾吸虫蛋白酶体β1新基因克隆与表达

作者：杨光; 荆春霞; 朱佩娴; 吴忠道; 徐劲; 余新炳

来源：中国公共卫生, 2006, 22(12): 1470-1472.

DOI：10.3321/j.issn:1001-0580.2006.12.033

• 华支睾吸虫
• 蛋白酶体
• 克隆
• 表达

目的通过筛选华支睾吸虫cDNA文库发现蛋白酶体β1(CsPSMB1)新基因,表达其重组蛋白,为进一步研究CsPSMB1的功能及应用提供基础数据。方法将插入于pBluscripetⅡSK(+)载体中的cDNA随机测序,发现CsPSMB1新基因。根据pGEX-4T-1的多克隆位点及CsPSMB1编码区序列设计引物,进行PCR扩增,双酶切后连接到pGEX-4T-1载体中。重组表达质粒pGEX-4T-1-CsPSMB1经PCR、双酶切及测序鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果发现了编码PSMB1基因的一个新成员CsPSMB1,CsPSMB1全长749个核苷酸,编码一个217个氨基酸残基的蛋白,理论分子量为24kD,预测的蛋白与人的PSMB1蛋白同源性为50%并且含有一个蛋白酶体结构域。序列已经成功登录GeneBank,登录号为AY849971。构建成功重组质粒pGEX-4T-1-CsPSMB1,经IPTG诱导后表达出PSMB1的GST融合蛋白。结论发现了华支睾吸虫新基因CsPSMB1,成功构建pGEX-4T-1-CsPSMB1重组表达载体并表达出了CsPSMB1的GST融合蛋白。

• 单位
  暨南大学; 中山大学; 基础医学院