CV-A5抗体制备及ELISA抗原检测方法的建立

作者：张小宇; 靳卫平; 王文辉; 吴杰; 卢佳; 孟胜利; 王泽鋆; 申硕^*

来源：中国免疫学杂志, 2021, 37(11): 1346-1351.

• 柯萨奇A组5型
• 多克隆抗体
• 单克隆抗体
• 双抗体夹心ELISA
• 抗原检测方法

目的:制备柯萨奇病毒A组5型(CV-A5)多克隆抗体和单克隆抗体,建立CV-A5抗原定量ELISA检测方法,用于CV-A5疫苗研制中抗原定量及质量控制。方法:纯化后的CV-A5全病毒颗粒作为免疫原,制备兔多克隆抗体并免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备、中和试验和ELISA法筛选获得CV-A5单克隆抗体。建立CV-A5抗原检测方法,确定线性范围,验证其准确度、精密度、稳定性、特异性;检测CV-A5病毒颗粒纯化过程样品抗原含量。结果:制备了高效价的CV-A5兔多克隆抗体及单克隆抗体并建立ELISA抗原检测法,检测范围为15.6～1 000.0 ng/ml;高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率为88.5%～128.7%;重复性验证CV分别为1.3%、3.2%、1.2%;中间精密度验证CV分别为2.1%、2.2%和3.5%;耐用性验证回收率为97.4%～127.6%;包被微孔板37℃放置3 d,样品回收率为101.7%～106.9%;特异性验证结果显示抗原检测方法仅识别CV-A5抗原,与CV-A5以外的抗原均无交叉反应。结论:建立的CV-A5 ELISA抗原检测法可用于纯化过程样品的抗原检测,为含CVA5的手足口病(HFMD)多价疫苗的研制提供质量控制方法。

• 单位
  武汉生物制品研究所有限责任公司