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摘要
目的探究青蒿琥酯(artesunate, ART)对大鼠脑卒中后神经元凋亡、炎性反应及小胶质细胞极化的影响。方法 (1)动物实验:将27只雄性SPF级SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组及ART治疗组, 每组9只。模型组和ART治疗组大鼠通过大脑中动脉闭塞法(middle cerebral artery occlusion, MCAO)建立脑卒中模型。ART治疗组大鼠于造模前3 d每天单次腹腔注射ART(25 mg/kg), 假手术组和模型组注射等体积溶剂。造模24 h后, 采用TTC染色评估脑梗死体积, Western blot检测梗死区、半暗带及海马区抗凋亡蛋白Bcl2的表达, TUNEL法检测神经元凋亡, 组织免疫荧光观察大脑皮质半暗带区域肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达。(2)细胞实验:培养小胶质细胞BV2, 分为对照组、氧糖剥夺/复氧组、氧糖剥夺/复氧+0.05 μmol/L ART组、氧糖剥夺/复氧+0.1 μmol/L ART组及氧糖剥夺/复氧+ 0.5 μmol/L ART组。通过qRT-PCR检测炎性因子白介素-6(interleukin-6, IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)及TNF-α的表达;通过Western blot检测M2型小胶质细胞标志蛋白CD206和ARG1的表达;收集上述各组的BV2细胞培养基作为条件培养基, 培养海马神经元细胞HT22, 通过CCK8法检测细胞活性。采用GraphPad Prism 7软件进行数据分析, 多组间比较采用单因素方差分析, 进一步的两两比较采用LSD法。结果 (1)动物实验结果:TTC染色结果显示, ART治疗组大鼠脑梗死体积百分比小于模型组[(23.09± 8.51)%, (39.63±5.71)%, t=33.93, P<0.01]。TUNEL染色结果显示, 模型组和ART治疗组凋亡细胞数目均高于假手术组[(638.90±177.82)个/mm2, (72.75±13.21)个/mm2, (16.16±2.73)个/mm2, 均P<0.05], 且ART治疗组凋亡细胞数低于模型组(P<0.05)。Western blot结果显示, 模型组的半暗带及梗死区的Bcl2蛋白表达均低于假手术组(均P<0.05)。而与模型组相比, ART治疗组的半暗带、海马区和梗死区的Bcl2蛋白表达均高于模型组(均P<0.05)。组织免疫荧光结果显示, 模型组和ART治疗组TNF-α荧光强度均高于假手术组(均P<0.05), 而ART治疗组TNF-α荧光强度低于模型组(P<0.05)。(2)细胞实验结果:qRT-PCR结果显示, 与对照组相比, 氧糖剥夺/复氧组细胞中IL-6 、IL-1β及TNF-α的mRNA水平均显著升高(均P<0.05), 而氧糖剥夺/复氧+0.05 μmol/L ART组、氧糖剥夺/复氧+0.1 μmol/L ART组及氧糖剥夺/复氧+0.5 μmol/L ART组中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达均显著低于氧糖剥夺/复氧组(均P<0.05)。Western blot结果显示, 与对照组相比, 氧糖剥夺/复氧组CD206[(0.85±0.04), (1.07±0.07), P<0.05]表达显著下调;而与氧糖剥夺/复氧组相比, 氧糖剥夺/复氧+0.1 μmol/L ART组CD206(1.22±0.06)、ARG1(1.35±0.08), 及氧糖剥夺/复氧+0.5 μmol/L ART组CD206(1.24±0.14)、ARG1 (1.14±0.07)的蛋白表达均显著高于氧糖剥夺/复氧组[(0.85±0.04), (0.85±0.05)均P<0.05]。CCK8结果显示, 与对照组相比, 氧糖剥夺/复氧组细胞活力显著下降(P<0.05)。氧糖剥夺/复氧+0.05 μmol/L ART组、氧糖剥夺/复氧+0.1 μmol/L ART组、氧糖剥夺/复氧+0.5 μmol/L ART组细胞活力均高于氧糖剥夺/复氧组(均P<0.05)。结论 ART可以减少脑卒中后神经元凋亡, 降低脑卒中后神经炎性反应, 可以促进氧糖剥夺/复氧激活的小胶质细胞BV2向M2型极化。
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单位湖北医药学院; 襄阳市第一人民医院; 神经内科
