DF-1细胞中TLR7编码基因的敲除及其抗FAdV-4感染的天然免疫应答

作者：恽君雯; 陈丽; 徐悦; 鲍熹; 冯磊^*; 高崧^*

来源：畜牧与兽医, 2023, 55(02): 80-90.

• 免疫应答
• DF-1细胞
• 禽腺病毒4型
• CRISPR/Cas9
• Toll样受体7

旨在构建高质量的禽源细胞系，应用CRISPR/Cas9技术实现鸡胚成纤维细胞(DF-1)的Toll样受体7(TLR7)编码基因的敲除，构建稳定的细胞培养禽腺病毒4型(FAdV-4)增殖体系。采用荧光定量PCR的方法对FAdV-4感染DF-1细胞后先天性免疫信号通路中效应分子进行检测，选择转录水平显著上调的基因TLR7作为研究对象；构建sgRNA载体与Cas9表达载体共转染DF-1细胞，经绿色荧光蛋白(GFP)阳性特征分选单克隆，PCR验证及增毒试验筛选后获得TLR7编码序列敲除的DF-1-TLR7-KO#3单克隆细胞系，命名为DF-1-TLR7-KO细胞。对敲除前后DF-1细胞的天然免疫系统对FAdV-4感染的拮抗效应和病毒在不同细胞中增殖效率的差异进行了研究。结果表明：成功构建的TLR7编码序列敲除的DF-1细胞系，与原始细胞相比病毒增殖能力提高。试验对细胞的天然免疫系统与FAdV-4感染的互作机理进行了初步探索，为更好地研究宿主对病毒入侵的应答机制，提高疫苗生产效能提供了研究基础和生物材料储备。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 江苏大学; 扬州大学; 江苏省农业科学院; 江苏省生产力促进中心