粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶基因的克隆、表达及定位分析

作者：张碧瀛; 单嘉男; 覃裴溪; 周涛勋; 周焕; 胡敏^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(01): 98-105.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.01.16

• 粪类圆线虫
• 虾青素金属蛋白酶
• 原核表达
• 显微注射

虾青素金属蛋白酶是一种广泛存在于多种动物体内的金属蛋白酶，研究表明该蛋白酶在寄生线虫的入侵和生长发育过程中发挥重要作用。但目前对粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶(Ss-AST-1)还所知甚少，研究旨在对该酶编码基因(Ss-ast-1)进行鉴定和表达分析，为进一步研究其功能奠定基础。利用生物信息学方法对Ss-ast-1基因进行序列分析，通过转录组数据分析Ss-ast-1在各个发育阶段的转录水平，转基因技术进行虫体内表达定位分析。通过体外原核表达重组蛋白，Western blot分析其抗原性。采用免疫荧光组织化学方法对Ss-AST-1在粪类圆线虫幼虫体内的定位进行研究。结果显示：Ss-ast-1基因全长1 905 bp,编码634个氨基酸；转录组分析该基因在iL3期的表达水平最高。定位分析表明该蛋白在虫卵细胞的细胞核和细胞质均有表达；体外表达重组蛋白的大小约67.5 kDa, Western blot分析表明多克隆抗体可以较好的识别全虫蛋白中的Ss-AST-1。免疫荧光结果显示Ss-AST-1在幼虫体内表达并分布幼虫的头部和体壁。Ss-ast-1属于虾青素金属蛋白酶家族，其可能在寄生虫入侵过程中发挥作用，为进一步探究粪类圆线虫蛋白功能奠定了良好的基础。

• 单位
  农业微生物学国家重点实验室; 华中农业大学