雷帕霉素抑制猴视网膜微血管内皮细胞增生的实验研究

作者：韩金栋; 颜华

来源：中华实验眼科杂志, 2014, 32(03): 216-219.

DOI：10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.03.007

• 血管内皮细胞
• 视网膜
• 血管生成
• 雷帕霉素
• 细胞周期蛋白D1

背景哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在细胞周期调控机制中扮演着重要角色,其抑制剂雷帕霉素(RAPA)可通过调控细胞周期抑制细胞增生。目的观察RAPA对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞RF/6A细胞系增生的影响。方法体外培养RF/6A细胞系,分别在培养液中加入PBS、10μg/L RAPA和5μg/L RAPA。采用Western blot法检测cyclin D1蛋白在各组RF/6A细胞中的表达;采用流式细胞仪检测不同质量浓度RAPA作用后G0/G1期RF/6A细胞的比例;行血管内皮细胞体外成管实验观察不同质量浓度RAPA对RF/6A细胞成管的抑制作用。结果 Western blot检测表明,PBS组、10μg/L RAPA组和5μg/L RAPA组RF/6A细胞中cyclin D1蛋白的相对表达量分别为0.92±0.04、0.58±0.02和0.73±0.02,3个组间的差异有统计学意义(F=246.320,P=0.000),其中10μg/L RAPA组和5μg/L RAPA组cyclin D1蛋白在RF/6A细胞中的相对表达量均明显低于PBS组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞周期检测发现,PBS组、10μg/L RAPA组和5μg/L RAPA组G0/G1期细胞比例分别为(42.13±0.57)%、(65.15±0.64)%和(54.09±0.78)%,3个组间差异有统计学意义(F=887.815,P=0.000),其中10μg/L RAPA组和5μg/L RAPA组RF/6A细胞G0/G1期比例明显高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。体外成管实验显示,PBS组、10μg/L RAPA组及5μg/L RAPA组每个视野下血管内皮细胞成管数分别为(9.67±1.53)、(4.33±0.58)和(6.33±0.58)个/视野,3个组间比较差异有统计学意义(F=21.778,P=0.002),10μg/L RAPA组内皮细胞管数最少,其次为5μg/L RAPA组,均明显少于PBS组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RAPA可通过下调cyclin D1蛋白的表达抑制RF/6A细胞的增生,较高质量浓度的RAPA作用更强。

• 单位
  天津医科大学总医院