表达非洲猪瘟病毒CD2v蛋白重组腺病毒的构建及其吸附红细胞特性的研究

作者：常星; 胡永新; 周昊; 赵永刚; 张永强; 戈胜强; 王建琳^*; 吴晓东^*

来源：中国预防兽医学报, 2021, 43(12): 1252-1257.

• 非洲猪瘟病毒
• 腺病毒载体
• CD2v蛋白

为构建表达非洲猪瘟病毒(ASFV)CD2v蛋白的复制缺陷型重组腺病毒，本研究将ASFV EP402R基因融合猪泛素(Ub)基因，并经密码子优化后整合至人复制缺陷性5型腺病毒(Ad5)骨架质粒，经Pac I酶切线性化后转染293A细胞，拯救重组腺病毒(Ad5-CD2vUb-YH)，结果显示，在转染8 d后出现典型细胞病变，且经测序鉴定显示插入片段与预期一致，表明拯救出一株重组腺病毒Ad5-CD2vUb-YH。利用Adeno-X快速滴度试剂盒测定F1～F3代Ad5-CD2vUb-YH的滴度，结果显示F1～F3代Ad5-CD2vUb-YH的滴度分别为1.36×108IFU/m L、1.47×108IFU/m L、2.16×108IFU/m L。利用直接免疫荧光试验(DFA)和western blot对F3代Ad5-CD2vUb-YH在Vero细胞中CD2v蛋白的表达进行鉴定，DFA鉴定结果显示感染Vero细胞的Ad5-CD2vUb-YH能与V5-FITC抗体特异性结合，细胞质内呈现特异性绿色荧光信号；Western blot鉴定结果显示感染Vero细胞的Ad5-CD2vUb-YH能与V5-HRP抗体和ASFV阳性血清均可进行特异性反应，在约102 ku和31 ku处均可见两条特异性条带，以上结果均表明CD2v蛋白得到了有效表达；进一步利用蛋白质谱对CD2v蛋白位置的胶块进行肽段序列测定并分析，结果显示其肽段序列与数据库中ASFV CD2v蛋白氨基酸序列匹配度为11%。对F3代Ad5-CD2vUb-YH感染293A细胞后吸附猪红细胞的能力进行鉴定，结果显示，Ad5-CD2v Ub-YH表达的CD2v蛋白具有吸附红细胞的特性。本研究首次获得了一株重组腺病毒Ad5-CD2vUb-YH，其表达的CD2v蛋白与ASFV的CD2v蛋白特性完全一致，为ASFV CD2v蛋白吸附红细胞功能域的研究和ASFV重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。

• 单位
  中国动物卫生与流行病学中心; 青岛农业大学