疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

作者：黄一挚; 刘泰; 黄明政; 陈朝; 甘典辉; 黄权芳; 梁丽英

来源：中国实验方剂学杂志, 2018, 24(03): 154-159.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.2018030154

• 疏血通脉胶囊
• 骨髓间充质干细胞
• 凋亡
• 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)
• B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)

目的:探讨疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的影响以及作用机制。方法:体外培养大鼠BMSCs,以不同浓度双氧水(H2O2)诱导BMSCs凋亡,取最适宜浓度1.0 mmol·L-1用于实验。疏血通脉胶囊低、中、高剂量(含生药1.81,3.62,7.24 g·kg-1)灌胃给药制备大鼠含药血清。选择第3代BMSCs,随机分正常组(不做处理,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液),模型组(H2O2诱导细胞凋亡,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液)和疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组(H2O2诱导细胞凋亡,分别加入对应剂量、体积分数为15%的疏血通脉胶囊含药血清培养液),共5组,作用24 h后噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞相对存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA的表达。结果:H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导BMSCs凋亡。MTT结果显示疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组细胞存活率较模型组有明显提高(P<0.01),且存活率随剂量增加而增高(P<0.05);Annexin V-FITC/PI流式细胞术结果显示疏血通脉胶囊含药血清可以降低H2O2诱导的BMSCs凋亡率(P<0.01)。Real-time PCR结果显示H2O2诱导可以增加BMSCs的Caspase-3 mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA表达。疏血通脉胶囊含药血清处理下调了Caspase-3 mRNA的表达(P<0.01),上调了Bcl-2 mRNA的表达(P<0.01)。结论:疏血通脉胶囊含药血清可通过上调Bcl-2基因表达,负性调控Caspase-3基因,从而抑制H2O2导致的BMSCs凋亡。

• 单位
  广西卫生职业技术学院; 广西中医药大学第一附属医院