miR-23b-3p调控脂蛋白(a)抑制同型半胱氨酸诱导的冠状动脉血管内皮细胞损伤

作者：马小峰^*; 刘欢; 李招兵; 谭剑凯

来源：第三军医大学学报, 2018, 40(22): 2074-2080.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201805205

• miR-23b-3p
• 脂蛋白(a)
• 同型半胱氨酸
• 内皮细胞

目的探讨miR-23b-3p作为一种高效降低载脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),Apo(a)]的内源性miR,对高同型半胱氨酸引起的冠状动脉内皮细胞损伤抑制效果及作用机制。方法通过生物信息学、miR芯片及基础实验筛选ETS1为靶基因,设计miR-23b-3p mimic/inhibitor。构建pmir GLOETS1 3’-UTR质粒分6组转染人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAECs),分别为A组(pmirGLO-ETS1 3’-UTR转染)、B组(miR-23b-3p inhibitor+pmir GLO-ETS1 3’-UTR转染)、C组(miR-23b-3p minics+pmirGLO-ETS13’-UTR转染)、D组(pmirGLO-ETS13’-UTR mut转染)、E组(miR-23b-3p minics+pmirGLO-ETS13’-UTR mut转染)和F组(miR-23b-3p inhibitor+pmirGLO-ETS13’-UTR mut转染),经双荧光素酶报告基因实验验证。HCAECs分为:对照组(无干预)、阴性对照组(miR-23b-3p inhibitor转染)和实验组(miR-23b-3p mimic转染)。3组细胞均置于含1. 0 mmol/L同型半胱氨酸(homocysteine,hcy)培养基中培养7 d。检测各组HCAECs存活率、miR-23b-3p和Apo(a) mRNA表达、akt、p-akt和eNOS蛋白表达。结果双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p能够和ETS13’-UTR直接结合,可得ETS1是miR-23b-3p直接靶基因。实验组HCAECs存活率(66. 22±5. 17)%、阴性对照组(42. 12±2. 35)%和对照组(38. 36±2. 21)%均显著低于正常HCAECs(P <0. 01),实验组HCAECs存活率显著高于阴性对照组和对照组(P <0. 01)。转染后,实验组miR-23b-3p mRNA表达显著高于阴性对照组和对照组(P <0. 01),实验组Apo(a) mRNA表达显著低于阴性对照组和对照组(P <0. 01)。转染后,实验组p-akt表达和eNOS蛋白相对表达显著高于阴性对照组和对照组(P <0. 01)。结论 miR-23b-3p能够以ETS1为靶基因,可能通过akt/eNOS信号通路下调hcy诱导损伤的内皮细胞中Apo(a)表达,从而保护冠状动脉血管内皮细胞。

• 单位
  南华大学附属南华医院