Epac在生长激素分泌性垂体腺瘤细胞中过表达并促进其对奥曲肽耐药的分子机制研究

作者：孙炜; 王俊文; 李然; 黄逸民; 张卓; 雷霆^*

来源：脑与神经疾病杂志, 2023, 31(07): 442-449.

• 生长激素分泌性垂体腺瘤
• 奥曲肽耐药
• Epac

目的 探索生长激素分泌性垂体腺瘤(GHPAs)对奥曲肽耐药的分子机制。方法 收集临床GHPAs患者肿瘤及旁侧正常组织标本各10例。采用qPCR法、Western blot法和免疫组织化学(IHC)法检测上述各10例标本中cAMP直接激活的交换蛋白(Epac)的表达情况。在大鼠垂体腺瘤GH3细胞中过表达Epac。CCK-8法测定过表达Epac前后及给予奥曲肽处理前后细胞增殖能力的变化;ELISA测定细胞分泌生长激素(GH)情况的变化;qPCR法和Western blot法测定细胞中SSTR2和ZAC1表达水平的变化。慢病毒转染GH3细胞过表达Epac并进行BALB/c裸鼠荷瘤实验,测定过表达Epac前后及给予奥曲肽治疗前后,裸鼠荷瘤增殖能力的变化;Western blot测定促肿瘤增殖关键通路蛋白Ras-1和ERK1/2的表达情况变化。结果 针对临床标本的研究,相较于旁侧正常组织,GHPAs组织中Epac mRNA和蛋白质表达水平均明显升高(P<0.05)。体外(in vitro)细胞水平实验,与pcDNA3.1组GH3细胞相比,pcDNA3.1+octreotide组GH3细胞增殖能力明显降低,GH分泌量明显下调,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平明显升高(P<0.05);而pcDNA3.1-Epac组GH3细胞增殖能力明显升高,GH分泌量明显增加,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平被明显抑制(P<0.05)。与pcDNA3.1-Epac组相比,pcDNA3.1-Epac+octreotide组GH3细胞增殖能力,GH分泌量,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平均无明显差异(P>0.05)。在体(in vivo)裸鼠荷瘤实验,与pSLenti组相比,pSLenti+octreotide组裸鼠荷瘤体积和质量明显较小,Ras-1和ERK1/2的表达被明显抑制;pSLenti-Epac组的荷瘤体积和质量明显较大,上述两种蛋白质的表达明显升高(P<0.05)。与pSLenti-Epac组相比,pSLenti-Epac+octreotide组裸鼠荷瘤体积和质量,以及Ras-1和ERK1/2的表达没有明显变化(P>0.05)。结论 临床部分GHPAs患者出现对奥曲肽的耐药性,其可能的分子机制为肿瘤细胞通过上调Epac,以抑制SSTR2和ZAC1的表达,并增强Ras-1和ERK1/2的表达,实现其高速增殖和对奥曲肽的耐药性。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院