脂氧素A4下调自噬活性对子宫内膜间质细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制

作者：李艳辉; 耿育红; 刘琳; 陈春艳; 高颖^*

来源：中华妇产科杂志, 2018, 53(08): 547-553.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2018.08.007

• 子宫内膜异位症
• 脂氧素类
• 自噬
• NF-κB
• 信号传导

目的探讨脂氧素A4(LXA4)下调自噬活性对子宫内膜异位症(内异症)患者子宫内膜间质细胞(ESC)侵袭和迁移的影响, 并进一步探索其分子作用机制。方法 (1)收集2015年10月至2016年6月在华中科技大学同济医学院附属协和医院行腹腔镜手术的内异症患者共13例的在位内膜及异位病灶组织标本, 以及非内异症患者共10例的子宫内膜组织标本;采用蛋白印迹法检测组织中自噬活性标志蛋白[微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62]的表达, ELISA法测定组织中LXA4的浓度, 并对异位病灶组织中LXA4的浓度与LC3-Ⅱ蛋白的表达水平进行相关性分析。(2)收集拟行体外受精-胚胎移植治疗的合并不孕的内异症患者的在位内膜组织, 经体外分离培养获得ESC;外源性LXA4、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤或自噬诱导剂雷帕霉素干预ESC, 细胞迁移和侵袭实验分析细胞的迁移和侵袭能力, 蛋白印迹法检测细胞中LC3、p62蛋白的表达。(3)LXA4干预ESC后, 逆转录实时定量荧光PCR技术检测自噬活性调控相关基因的表达水平, 蛋白印迹法分析核因子κB(NF-κB)信号通路相关分子的表达。(4)NF-κB信号通路阻断剂BAY11-7080干预ESC, 蛋白印迹法检测LC3、p62蛋白的表达。结果 (1)与内异症患者及非内异症患者的在位内膜组织比较, 内异症异位病灶组织中LC3-Ⅱ蛋白的表达水平(0.29±0.04)及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(0.43±0.03)均显著增加(P均<0.05);而异位病灶组织中LXA4浓度却显著低于内异症患者和非内异症患者的在位内膜组织[分别为(20.6±5.7)、(39.1±8.7)和(44.3±9.3)ng/L;P均<0.05]。异位病灶组织中LC3-Ⅱ蛋白的表达水平与LXA4浓度呈显著负相关(r=-0.780, P=0.002)。(2)10、100 nmol/L的LXA4干预后ESC中LC3-Ⅱ蛋白的表达水平显著下调、p62蛋白的表达水平显著上调(P均<0.05)。LXA4干预能显著抑制ESC的迁移和侵袭能力, ESC的迁移细胞数及侵袭细胞数均明显减少(P均<0.05), 而自噬诱导剂雷帕霉素预处理ESC后, 可逆转LXA4的抗细胞迁移和侵袭作用, 迁移细胞数及侵袭细胞数有差异(P均<0.05)。(3)LXA4干预后显著下调了ESC中NF-κB基因的表达水平(P<0.05)。LXA4干预也显著抑制了ESC细胞核内NF-κB p65蛋白的表达水平(P<0.05)。(4)NF-κB信号通路阻断剂干预ESC后可模拟外源性LXA4的干预效应, 导致ESC中LC3-Ⅱ蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论 LXA4可通过下调NF-κB信号通路介导的自噬活性抑制ESC的侵袭和迁移, 进而发挥其抗内异症发生、发展的作用。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院