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摘要
为建立农杆菌介导的紫花苜蓿高效遗传转化体系,以‘中苜1号’和‘保定苜蓿’为试验材料,选用离体叶片为外植体,采用农杆菌介导法将双元质粒载体pCA-GR导入紫花苜蓿,研究了不同浓度的两种抑菌剂(羧苄青霉素和特美汀)、Ag+、激素(KT和NAA)组合以及基因型对紫花苜蓿转化频率的影响。结果表明:当选择培养基中无其它添加时,两个基因型在转化频率上存在显著差异,‘保定苜蓿’的转化率达到4.48%,显著高于‘中苜1号’苜蓿(2.97%)。当选择培养基中激素浓度组合为2 mg/L KT+0.1 mg/L NAA,并含有2.5 mg/L Ag NO3和150 mg/L特美汀时‘,保定苜蓿’的转化率最高,达到10.42%;对卡那霉素抗性植株进行了PCR、Southern blot鉴定及除草剂抗性评价,表明除草剂抗性基因GR79Ms已成功导入受体紫花苜蓿基因组中并得到表达。本研究优化了紫花苜蓿的遗传转化体系,为转基因技术在紫花苜蓿育种中的应用提供了技术支持。
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