结核分枝杆菌rv3668c基因的原核表达及多抗制备

作者：鄢秋龙; 陈利苹; 刘银冰; 曹俊; 倪宏波; 刘思国

来源：中国兽医科学, 2013, (06): 594-598.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2013.06.004

• 结核分枝杆菌
• rv3668c基因
• 原核表达
• 免疫原性 Mycobacterium tuberculosis
• rv3668c gene
• prokaryotic expression
• immunogenicity

以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3668c基因,将其连接于表达载体pET-30a(+),获得重组质粒p30a-68,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白His-Rv3668c。用Ni-NTA His-Bind Resin亲和层析树脂纯化目的蛋白,利用抗6His标签抗体验证蛋白的纯化结果;通过Western-blot分析纯化蛋白与牛结核病阳性血清的反应情况。用重组蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果显示,重组质粒的双酶切鉴定和DNA序列测定均完全正确;SDS-PAGE和Western-blot分析...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 黑龙江八一农垦大学; 兽医生物技术国家重点实验室; 动物科技学院