牦牛外周血单个核细胞抑制消减cDNA文库的构建及部分差异表达分子的克隆分析

作者：何延华; 景志忠; 陈国华; 房永祥; 蒙学莲; 李小庆; 段风云; 王生富

来源：中国预防兽医学报, 2009, (08): 631-636.

• 外周血单个核细胞(PBMC)
• 诱导刺激
• 抑制消减杂交
• cDNA文库 PBMC
• stimulation
• suppression subtractive hybridization(SSH)
• cDNA libraries

为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了EST序列分析。从消减文库中随机挑取16个阳性克隆,进行PCR鉴定,显示克隆的重组率大于93%,插入片段大小大部分集中在200bp～1000bp之间。随机挑取100个克隆进行测序及同源性分析,初步获得27条差异表达基因片段,其中24个为已知基因,3个为新ESTs序列;随机选择非重复的6个差异表达的序列设计引物,以半定量PCR方法验证其消...

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所