柯萨奇病毒B4 2B基因siRNA表达载体的构建及其对柯萨奇病毒B4抑制作用的研究

作者：史红艳; 周密; 陈佳玉; 王朝飞; 李凡

来源：中国实验诊断学, 2006, (01): 52-55.

• 哥萨奇病毒
• SiRNA
• 转染

目的构建针对柯萨奇病毒B4 2B基因的siRNA表达载体并检测该载体在体外培养细胞中对柯萨奇病毒B4的抑制作用。方法选择柯萨奇病毒B4的2B基因区21bp的基因片段作为靶序列,合成含有靶序列的DNA片段并克隆到pGCsi-U6/Neo/GFP/siNeGative载体中,构建pGCsi-U6/Neo/GFP/2B,使其可表达具有发夹结构的双链siR-NA,在转染该载体后用柯萨奇病毒B4攻击Hela细胞,检测该载体对病毒感染细胞的保护效应。结果通过酶切、电泳、序列分析及荧光显微镜观察证明载体构建成功,而且pGCsi-U6/Neo/GFP/2B转染组的柯萨奇病毒B4的滴度及TCID50都明显低于pGCsi-U6/Neo/GFP/siNeGative转染组。结论成功构建了柯萨奇病毒2B基因的siRNA表达载体,而且该载体在体外培养细胞中对柯萨奇病毒的复制具有抑制作用。

• 单位
  基础医学院; 吉林大学