金黄色葡萄球菌金属磷酸酶的遗传特征分析及功能鉴定

作者：于立权^*; 吕茂利; 丁子秋; 刘振华; 李玉环; 秦学功; 崔玉东

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(02): 136-143.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.002976

• 金黄色葡萄球菌
• 金属磷酸酶
• 遗传特征
• 生物学功能

目的对金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)一种新型金属磷酸酶(metallophosphatase,MPP)SA1662进行遗传特征分析及生物学功能鉴定。方法从金葡菌基因组DNA中克隆SA1662基因,通过序列比对和构建进化树分析其遗传特征;构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni柱纯化后,测定酶活性。应用同源重组技术构建SA1662基因缺失株,分析SA1662基因缺失对金葡菌生长、万古霉素敏感性、细菌自溶性和细菌生物菌膜形成的影响,探讨SA1662的生物学功能。结果 SA1662蛋白具有MPP类蛋白结构域,并含有特征性金属离子结合位点,与金葡菌和施维茨葡萄球菌中相关蛋白有更近的亲缘关系。该蛋白酶活性依赖于Mg2+和Mn2+,特别是Mg2+。与野生型菌株相比,SA1662基因缺失后,细菌生长速度减慢,万古霉素敏感性、TritonX-100诱导下的细菌自溶性和细菌生物菌膜形成能力均下降。结论 SA1662蛋白为一种新型的金葡菌MPP,在细菌抗逆性中起着重要作用。

• 单位
  生命科学技术学院; 黑龙江八一农垦大学