壳聚糖对分层及纯化培养的视网膜神经节细胞生长的促进作用

作者：唐大川; 杨红

来源：眼科新进展, 2012, 32(08): 716-720.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2012.08.022

• 视网膜神经节细胞
• 壳聚糖
• 分层培养
• 纯化

目的研究壳聚糖对体外培养的鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)生长的影响。方法取SD乳鼠视网膜,将视网膜分为内层、外层及全层后,分别制成细胞悬液,各自进行培养。实验组加入含100g.L-1壳聚糖的培养基,对照组不加壳聚糖。每天观察细胞生长状态,用MTT比色法检测细胞存活率(OD值)。各层细胞分别用Thy1.1抗体鉴定RGC,计算各层细胞的RGC率。两步法提纯RGC,提纯后分别加入含体积分数10%血清、100g.L-1壳聚糖及鼠神经生长因子的培养基,观察细胞生长状态。结果分层培养细胞的存活率:各层细胞培养后1d、2d存活率最高,MTT比色法结果显示:培养1d后外层OD值为1.189±0.158,内层为1.084±0.150,全层为1.381±0.089;随着培养时间的延长,细胞存活率逐渐降低(P<0.05):外层OD值3d为0.835±0.120、4d为0.805±0.116、5d为0.782±0.107;内层OD值:3d为0.388±0.095、4d为0.371±0.084、5d为0.347±0.052;全层OD值:3d为0.523±0.047、4d为0.340±0.084、5d为0.227±0.057;相同时间点实验组(壳聚糖组)比对照组(不含壳聚糖)的存活率高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。经细胞免疫组化鉴定,内层RGC%最高(19.248±0.999)%,其次为全层(4.986±0.635)%,外层最低(0.748±0.177)%。两步法提纯神经节细胞:提纯率可达95%以上。纯化的神经节细胞培养2d后测量最大轴突长度,壳聚糖组:62.5μm、NGF组:37.5μm、空白对照组:12.5μm,壳聚糖组及NGF组轴突均比对照组长。结论混合培养的各层细胞中,内层细胞的节细胞率最高。在混合培养的各层细胞中加入壳聚糖,能促进其生长并提高存活率。加入壳聚糖或鼠神经营养因子后,能促进纯化的RGC的生长。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院