小干扰RNA沉默PHF19基因表达后对宫颈癌细胞生物学行为的影响

作者：陈梦茜; 金在顺^*; 徐春艳; 刘瑞芳; 杨光; 董程骥

来源：牡丹江医学院学报, 2019, 40(02): 16-21.

DOI：10.13799/j.cnki.mdjyxyxb.2019.02.005

• 宫颈癌
• 锌指蛋白19
• 小干扰RNA
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• NF-κB信号通路

目的探讨小干扰RNA沉默宫颈癌细胞中PHF19基因表达后对宫颈癌细胞的增殖、凋亡以及对NF-κB信号通路的影响。方法培养人宫颈癌He La细胞,根据转染的si RNA-PHF19及其浓度和时间进行分组。MTT比色法筛选出最佳的si RNA-PHF19及其作用浓度与时间,q RT PCR和Western Blot检测加入转染试剂si RNA-PHF19后PHF19基因及蛋白的表达量,Ed U检测加入转染试剂si RNA-PHF19后He La细胞的增殖情况,TUNEL法检测加入转染试剂si RNA-PHF19后He La细胞的凋亡情况,q RT PCR检测加入转染试剂si RNA-PHF19后Bax、Bcl-2、Caspase-3、TNF、NFKBIA、p53基因的表达量。结果通过q RT PCR分析显示,对比正常组He La细胞中的PHF19的表达量,在24 h时,加入si RNA-PHF19-1-50μM、si RNAPHF19-3-10μM干扰试剂对PHF19基因的抑制极其显著(P<0.0001),加入si RNA-PHF19-2-50μM、si RNA-PHF19-3-50μM干扰试剂对PHF19基因的抑制最显著(P<0.0001)。通过Western blot检测24h的正常He La细胞以及加入转染试剂si RNAPHF19-2-50μM、si RNA-PHF19-3-50μM和Non-specific control(NC)组的He La细胞中PHF19蛋白的表达发现,对比正常组He La细胞中PHF19的表达,加入si RNA-PHF19-2-50μM和NC组干扰试剂的He La细胞中PHF19降低有显著的统计学差异(P<0.01)。Ed U检测细胞增殖,与He La组相比,加入转染试剂si RNA-PHF19-2-50μM、si RNA-PHF19-3-50μM和NC后Ed U阳性率极低,表现出抑制细胞增殖的作用。TUNEL法检测细胞凋亡,与He La组细胞相比,si RNA-PHF19-2-50μM处理的He La细胞TUNEL阳性细胞显著增多。通过q RT PCR分析显示,对比正常组He La细胞中Bax、Bcl-2和Caspase-3基因的表达量无统计学意义,对比正常组He La细胞中TNF的表达,加入si RNA-PHF19-2-50μM干扰试剂组He La细胞中TNF基因表达量上调极其显著(P<0.001),加入si RNA-PHF19-3-50μM和NC干扰试剂组He La细胞中TNF基因表达量下降有统计学意义(P<0.05)。对比正常组He La细胞中NFKBIA的表达,加入si RNA-PHF19-2-50μM、NC组干扰试剂的NFKBIA基因表达上调最显著(P<0.0001)。结论 PHF19基因在He La细胞中高表达,si RNA-PHF19干扰He La细胞后,会对He La细胞的增殖与凋亡产生影响,其主要作用是使He La细胞发生凋亡,He La细胞凋亡的产生主要是由死亡受体途径介导的,在死亡受体途径中,TNF激活下游的NF-κB通路,使NFKBIA过表达,NFKBIA可能在He La细胞中介导p53基因失活。

• 单位
  牡丹江医学院