miRNA-1和miRNA-133过表达对诱导性多能干细胞心肌分化的影响

作者：王芳芳; 白宝宝^*; 曾迪; 楚轶; 李雪

来源：中国医药导报, 2018, 15(31): 4-15.

• 过表达
• 诱导性多能干细胞
• 心肌分化
• miRNA-1
• miRNA-133

目的探讨miRNA-1和miRNA-133过表达对诱导性多能干细胞(iPSC)心肌分化的影响。方法取2周龄美国国家癌症研究所(ICR)孕鼠的胚胎,0.5 g/L胰酶消化接种,传至3代后采用丝裂霉素进行处理,37℃孵育培养小鼠诱导性多能干细胞(miPSC),将生长于胚胎成纤维细胞上的miPSC消化传代;更换培养基,加入对照miRNA (U6)(10 nmol/L,记为对照组),miRNA-1 (10 nmol/L,记为miRNA-1组)、miRNA-133 (10 nmol/L,记为miRNA-133组)、miRNA-1和miRNA-133(分别为10 nmol/L,记为miRNA-1+133组)转染24 h后PBS洗涤,加入miPSC分化培养基,观察每日变化并计算细胞搏动率以表示分化效率。RT-PCR检测miRNA-1、miRNA-133及心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果未分化的miPSC中较少表达cTnT,与分化0 d时比较,分化5 d后miRNA-1组及miRNA-133组内cTnT的表达水平明显升高(P <0.05),分化10 d时升高更明显(P <0.01)。分化10 d时,miRNA-1+133组cTnT表达水平较miRNA-1组及miRNA-133组更高(P <0.01)。与对照组比较,miRNA-1组及miRNA-133组细胞搏动率无变化(P> 0.05),但miRNA-1+133组搏动率显著提升(P <0.01)。结论单独应用miRNA-1或miRNA-133对心肌的分化无促进作用,共表达miRNA-1、miRNA-133可显著提高miPSC向心肌细胞定向分化的效率。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学