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摘要
目的：基于MCP-MS2示踪系统构建能稳定分泌含有标签的膜联蛋白A2(ANXA2)RNA的外泌体的供体细胞株。方法：利用慢病毒载体构建稳定表达MCP-EGFP的HEK293细胞株，采用流式细胞技术筛选具有较好荧光特性的单克隆细胞株。然后再次通过慢病毒稳定表达系统构建出能分泌结合有MCP-EGFP标记的ANXA2 RNA外泌体的供体细胞株。通过透射电镜、NTA、NanoFCM、共聚焦显微镜等仪器对供体细胞所产生的外泌体进行表征。结果：通过慢病毒载体成功构建了MCP-EGFP稳定表达细胞株，然后利用该细胞株通过慢病毒载体成功导入含有MS2标签的ANXA2基因。实验结果表明，构建的供体细胞与正常细胞所分泌的外泌体形态相似，实实施时荧光定量PCR的结果显示分泌的外泌体中含有MS2特殊序列，而同时Western blot的结果显示分泌的外泌体中含有EGFP蛋白。结论：通过慢病毒法成功建立了能分泌含有MS2标记的ANXA2 RNA的外泌体供体细胞株，为高效、稳定的装载特定RNA外泌体的供体细胞株的构建提供了新的方法和理论基础。
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单位广州医科大学附属第二医院; 广东省教育厅; 中心实验室
