鸭疫里默氏杆菌Porin蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用

作者：包涛涛; 鲜思美^*; 顾庆林; 杨倩; 梁倩; 杨先富; 吴通奎; 王正文; 廖飞

来源：中国兽医学报, 2022, 42(09): 1830-1837.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.09.16

• 鸭疫里默氏杆菌
• Porin蛋白
• ELISA

旨在建立一种新型可适用于鸭疫里默氏杆菌(RA)病抗体检测的间接ELISA方法。以血清2型RA贵州分离株为研究对象，将其微孔蛋白Proin编码的基因克隆至pET-32a载体，构建重组表达质粒pET-32a-porin,在E.coli BL21(DE3)中使用IPTG诱导后表达。以纯化后的Porin蛋白作为包被抗原，通过一系列条件的优化建立一种检测RA抗体的间接ELISA方法，对其性能进行综合评价。结果显示，该方法具有较好的敏感性、重复性及特异性，阳性血清经1∶6 400稀释后检测结果仍为阳性，批内变异系数(CV)在1.27%～4.90%之间，批间CV在2.59%～5.43%之间，该方法可特异性地检测出抗RA抗体，与禽流感病毒(AIV)H5亚型、AIV H7亚型、新城疫病毒(NDV)、鸭圆环病毒(DuCV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)及E.coli阳性血清均无交叉反应，与商品化ELISA抗体试剂盒检测相比，两者符合率为97.26%。使用建立的ELISA方法对临床采集的801份样品血清开展抗体检测分析(626份为已免疫鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗“血清1型+血清2型”的样品血清，175份为未免疫任何鸭传染性浆膜炎疫苗的样品血清),有564份为免疫抗体阳性，检出阳性率为90.01%(564/626),有36份为感染抗体阳性，检出阳性率为20.99%(36/175)。结果表明，本研究建立了一种新型可用于RA抗体检测的间接ELISA方法，为RA的血清学流行病学调查提供了新的检测方法。

• 单位
  贵州农业职业学院; 贵州大学; 动物科学学院