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摘要
目的探讨刺五加皂苷E对人增生性瘢痕成纤维细胞(Fb)生长的影响及作用机制。方法采用实验研究方法。收集北部战区总医院2018年10月—2019年3月收治的6例增生性瘢痕患者[男1例、女5例, 年龄20～51(37±8)岁]的增生性瘢痕组织, 培养第3～7代人增生性瘢痕Fb用于后续实验。取细胞, 分为生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组, 分别加入生理盐水, 终物质的量浓度为100、200、400 μmol/L的刺五加皂苷E。取细胞, 分为单纯小干扰RNA(siRNA)-阴性对照组、单纯siRNA-血小板反应蛋白1(THBS1)组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组, 单纯siRNA-阴性对照组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞转染siRNA-阴性对照, 单纯siRNA-THBS1组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞转染siRNA-THBS1, 转染24 h后单纯siRNA-阴性对照组和单纯siRNA-THBS1组细胞加入生理盐水, siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞加入终物质的量浓度为400 μmol/L的刺五加皂苷E。于处理后0(即刻)、12、24、36、48 h, 采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性(以吸光度值表示)。取细胞分为生理盐水组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组, 另取细胞分为单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组, 相应处理同前, 于处理后24 h, 行Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况。取细胞分为生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组, 另取细胞分为单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组, 相应处理同前, 于处理后24 h, 采用蛋白质印迹法检测细胞THBS1蛋白水平。以上实验每组各时间点样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验、Bonferroni校正。结果处理后0 h, 生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近(P>0.05)。处理后12、24、36、48 h, 100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值均明显低于生理盐水组(t=7.64、28.94、13.69、5.87, 6.96、22.83、14.75、11.52, 21.09、20.15、29.52、23.12, P<0.05或P<0.01)。处理后0 h, 单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近(P>0.05);处理后12、24、36、48 h, 单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值明显低于单纯siRNA-阴性对照组(t=7.14、44.87、20.67、40.98, 9.26、11.08、15.33、20.56, P<0.05或P<0.01), 单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值与siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组相近(P>0.05)。处理后24 h, 与生理盐水组比较, 200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量增加。处理后24 h, 与单纯siRNA-阴性对照组比较, 单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量增加;单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量相近。处理后24 h, 100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞THBS1蛋白水平(0.87±0.12、0.38±0.07、0.20±0.09)均明显低于生理盐水组(1.83±0.17, t=16.61、16.17、17.29, P<0.01)。处理后24 h, 单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞THBS1蛋白水平(0.61±0.07、0.58±0.07)均明显低于单纯siRNA-阴性对照组(1.86±0.07, t=71.06、83.80, P<0.01), 单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞THBS1蛋白水平与siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组(0.63±0.11)相近(P>0.05)。结论刺五加皂苷E能够通过下调人增生性瘢痕Fb中THBS1蛋白表达, 发挥抑制人增生性瘢痕Fb生长的作用。
