稳定表达人血红素加氧酶-1细胞系的建立及其功能鉴定

作者：杨根欢; 吴为; 李砚川; 倪冷; 王占启; 宋希涛; 刘昌伟

来源：中国医学科学院学报, 2014, 36(04): 420-425.

DOI：10.3881/j.issn.1000-503X.2014.04.013

• 血红素加氧酶-1
• 慢病毒
• 稳定细胞株
• 氧化损伤

目的构建稳定表达人血红素加氧酶-1(HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用。方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒。用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Western blot检测HO-1的表达。将重组质粒与慢病毒辅助质粒(plp1、plp2、VSVG)共同转染HEK293T细胞,包装有活力的慢病毒。用携带HO-1的慢病毒感染HEK293T细胞,筛选出能稳定表达目的基因的单克隆,并行Western blot检测HO-1的表达。将过氧化氢加入正常的及过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞,检测细胞内活性氧的含量。结果成功筛选出能稳定表达HO-1的单克隆细胞系并扩大培养,Western blot检测其HO-1的表达明显升高。加入过氧化氢后,过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞内的活性氧明显减少。结论成功构建了能稳定表达人HO-1的细胞系,内源性过表达HO-1能够对抗细胞的氧化损伤。

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院北京协和医学院; 北京协和医院