转移相关1基因对胃癌细胞生物学行为的影响

作者：王劲松; 钱海利; 王海娟; 许东奎^*

来源：中华肿瘤杂志, 2018, 40(08): 580-586.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2018.08.004

• 胃肿瘤
• 转移相关基因1
• 生物学行为
• 细胞系
• 裸鼠

目的研究肿瘤转移相关1(MTA1)基因对胃癌细胞迁移、侵袭、生长等多种生物学特性的影响。方法利用pSilencer3.1-MTA1-siRNA载体构建稳定敲降MTA1的人胃癌BGC-823细胞,通过Boyden实验、划痕愈合实验、克隆形成实验和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测敲降MTA1基因对BGC-823细胞多种生物学行为的影响。同时,利用pcDNA3-MTA1质粒过表达MTA1基因进行反向验证。在裸鼠皮下分别注射pSilencer3.1-MTA1-siRNA转染细胞、pcDNA3-MTA1转染细胞和对照细胞,检测MTA1基因对胃癌BGC823细胞体内成瘤能力的影响。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定pSilencer3.1-MTA1-siRNA转染组、pcDNA3-MTA1转染组和对照组细胞中integrinβ1、cyclinD1和尿激酶受体(uPAR)等转移相关基因的表达,观察其与MTA1表达的相关性。结果成功构建了稳定敲降及过表达MTA1的BGC-823细胞。Boyden实验和划痕愈合实验结果显示,与对照组细胞比较,pSilencer3.1-MTA1-siRNA转染组发生迁移和侵袭的细胞数明显减少[分别为(25±2)和(12±1)个],pcDNA3-MTA1转染组发生迁移和侵袭的细胞数则明显增多[分别为(218±2)和(269±3)个],差异均有统计学意义(均P<0.01)。MTT法和克隆形成实验结果表明,pcDNA3-MTA1转染组细胞生长加快,克隆形成能力增强,pSilencer3.1-MTA1-siRNA转染组细胞与之相反。皮下成瘤实验显示,pSilencer3.1-MTA1-siRNA转染组肿瘤体积和重量分别为(711.32±284.30)mm3和(0.87±0.24)g,明显小于对照组[(1 482.41±511.90)mm3和(1.39±0.30)g],而pcDNA3-MTA1转染组肿瘤体积和肿瘤重量分别为(3 158.73±1 823.22)mm3和(2.23±0.51)g,明显大于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。RTPCR检测结果显示,与对照组细胞比较,pSilencer3.1-MTA1-siRNA转染组细胞cyclinD1、integrinβ1和uPAR mRNA表达下调,而pcDNA3-MTA1转染组细胞cyclinD1、integrinβ1和uPAR mRNA表达上调。结论敲降MTA1可削弱人胃癌BGC-823细胞的增殖、侵袭及迁移能力,而MTA1的过表达不仅能够增强BGC-823细胞的上述能力,还明显促进BGC-823细胞的体内成瘤能力,并诱发恶性胃癌表型。MTA1可能通过调控其他转移相关基因进而调控肿瘤细胞的多种生物学行为。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 分子肿瘤学国家重点实验室