miR-23b-3p调控肾间质成纤维细胞成骨样分化参与Randall斑形成的机制研究

作者：雷波; 邱明星^*; 刘健男

来源：安徽医科大学学报, 2023, 58(12): 2064-2072.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.12.012

• miR-23b-3p
• 人肾间质成纤维细胞
• 肌细胞增强因子2C
• 成骨样分化
• Randall斑
• 草酸钙结石

目的 探究miR-23b-3p对肾间质成纤维(hRIFs)细胞成骨样分化和Randall斑形成的影响及其可能机制。方法 采用qRT-PCR技术检测草酸钙(CaOx)结石患者Randall斑组织(RP)和接受肾切除术的肾肿瘤患者正常乳头状组织(nRP)的miR-23b-3p和肌细胞特异性增强子因子2C(MEF2C)、成骨标志物人骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达水平；体外分离、培养hRIFs细胞，将miR-23b-3p过表达质粒pSi-miR-23b-3p及空载质粒pSi-NC和MEF2C慢病毒过表达质粒Lv-MEF2C及空载质粒Lv-NC转染至hRIFs细胞中，并诱导细胞成骨分化14 d; ELISA法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性；茜素红染色观察各组细胞矿化结节形成情况；qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和MEF2C、OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平；Western blot检测细胞中MEF2C蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p与MEF2C的靶向关系。结果 (1)与nRP组比较，RP组中miR-23b-3p低表达，而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA高表达；(2) hRIFs成骨诱导14 d后，细胞中ALP活性升高，矿化结节形成能力增强，miR-23b-3p表达水平降低，而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA表达水平及MEF2C蛋白表达水平升高；(3) miR-23b-3p过表达降低成骨诱导后hRIFs细胞中ALP活性，抑制细胞矿化结节形成能力，下调细胞中OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平；(4) MEF2C过表达可逆转miR-23b-3p过表达对hRIFs细胞成骨分化的抑制作用；(5) MEF2C是miR-23b-3p下游靶基因。结论 miR-23b-3p在RP组织及hRIFs细胞成骨样分化过程中低表达，上调miR-23b-3p可抑制hRIFs细胞的成骨样分化，其作用机制可能与靶向沉默MEF2C有关。

• 单位
  西南医科大学; 四川省人民医院