尼罗罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达及条件优化

作者：黄瑜; 牛金中; 汤菊芬; 鲁义善; 汪志文; 郑琦; 蔡佳^*; 简纪常^*

来源：基因组学与应用生物学, 2018, 37(09): 3753-3758.

DOI：10.13417/j.gab.037.003753

• 尼罗罗非鱼
• NCCRP-1
• 原核表达
• Western blotting

非特异性细胞毒性细胞受体蛋白(non-specific cytotoxic cell receptor protein 1,NCCRP-1)是一种在鱼类非特异性细胞毒性细胞(non-specific cytotoxic cell,NCC)活化过程起到关键作用的受体蛋白,也是NCC表面的一种分子标记。本研究根据NCBI上已公布的罗非鱼NCCRP-1基因序列,设计一对带酶切位点的引物,经PCR扩增、酶切、连接等步骤,构建罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达质粒p GEX-NCCRP-1,将重组质粒导入至大肠杆菌BL21中,成功表达了NCCRP-1重组蛋白。对影响NCCRP-1表达的IPTG浓度、诱导时间、诱导温度等因素进行了优化,发现在20℃下,采用0.2 mmo I/L IPTG诱导5 h,可以诱导NCCRP-1可溶性重组蛋白的高效表达。而免疫印迹结果显示,经纯化后的重组蛋白可与GST-Tag单克隆抗体发生特异性反应,进而表明表达的重组蛋白是罗非鱼NCCRP-1蛋白。该结果为后续罗非鱼NCCRP-1的单克隆抗体制备以及NCCRP-1相关的功能研究奠定了重要基础。

• 单位
  广东海洋大学; 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室