人呼吸道合胞病毒qRT-PCR绝对定量检测法的建立

作者：刘春源; 杨筱萌; 罗语思; 何淼; 张勇; 刘鉴; 牟荣; 沈祥春; 李金福^*; 张科^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(09): 1033-1037.

DOI：10.13350/j.cjpb.200908

• 人呼吸道合胞病毒
• 实时荧光定量PCR
• N基因
• 绝对定量检测法

目的建立检测人呼吸道合胞病毒(human Respiratory Syncytial Virus, hRSV)实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)绝对定量检测法。方法提取人呼吸道合胞病毒mRNA并逆转录为cDNA,以cDNA为模板,用hRSV的N基因作为目的基因设计的引物进行PCR扩增,扩增产物连接到pMDTM 18-T载体,构建标准检测质粒。以构建的标准检测质粒进行qRT-PCR,建立绝对定量检测的标准曲线。结果 PCR扩增获得714 bp产物,与pMDTM 18-T载体连接构建的标准检测质粒测序验证成功。qRT-PCR检测目的基因扩增效率E为105.2%,R2=0.998,在1.0×102～1.0×108拷贝范围内具良好线性关系,最低检测限为100拷贝/反应。结论成功建立了hRSV qRT-PCR绝对定量检测法,该方法快速、特异、灵敏,为hRSV诊断试剂盒的研制奠定了基础。

• 单位
  贵州医科大学; 基础医学院