特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

作者：梁华晟; 薛耀明; 钟宇华

来源：南方医科大学学报, 2010, (09): 2093-2096.

• 甲状旁腺激素受体1基因
• 小干扰RNA
• 小发卡结构RNA
• 转染
• RNA干扰
• 细胞周期 parathyroid hormone 1 receptor
• small interfering RNA
• small hairpin RNA
• gene transfection
• RNA interference
• cell cycle

目的构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响。方法根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期。结果菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确。并能成功转染到INS-1细胞株中,W...

• 单位
  北海市人民医院; 南方医科大学