非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白C'末端SBP-3×Flag标记的HCT 116结直肠癌细胞模型的建立

作者：黄泽彬; 张泽延; 张晓东; 缪时英; 王琳芳; 杜润蕾

来源：中国医学科学院学报, 2011, (06): 624-628.

• 非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白
• 基因敲入
• 同源重组
• HCT116
• 结直肠癌 targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2
• knock-in
• homologous recombination
• HCT 116
• colorectal cancer

目的建立非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)C'末端SBP-3×Flag标记的HCT116结直肠癌细胞模型。方法 PCR扩增同源臂,构建TPX2的腺相关病毒打靶载体,包装病毒后打靶HCT116结直肠癌细胞,G418和PCR筛选获得含有新霉素抗性基因的阳性细胞株,最后通过Cre病毒感染去除抗性基因,并用PCR方法筛选获得TPX2C末端SBP和3×Flag内源性双标签的HCT116结直肠癌细胞株。结果筛选获得2个含有新霉素抗性基因的细胞株,随后经Cre病毒感染得到去除新霉素抗性基因的阳性细胞克隆,并经Western blot检测验证了SBP-3×Flag基因的敲入。结论成功建立了TPX2 C...

• 单位
  武汉大学; 医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院北京协和医学院; 生命科学学院