肠道病毒71型能诱导THP-1巨噬细胞的自噬和凋亡

作者：罗文英; 杨拉维; 潘庆军; 邱丽红^*

来源：南方医科大学学报, 2020, 40(06): 828-836.

• 肠道病毒71型
• THP-1巨噬细胞
• 自噬
• 凋亡

目的探讨肠道病毒71型(EV71)诱导THP-1巨噬细胞自噬和凋亡及其相关信号通路。方法设置EV71处理组和DMEM对照组,EV71处理组是用感染复数0.1感染THP-1巨噬细胞2、8和16 h,对照组是用DMEM培养基作为阴性对照即是0 h组。CCK-8检测EV71对THP-1巨噬细胞增殖和毒性的影响;荧光定量PCR法检测EV71在细胞内病毒核酸变化情况;透射电镜观察THP-1巨噬细胞内超微结构变化;Hoechst 33342染色法和AnnexinV/PI双染法检测EV71诱导THP-1巨噬细胞凋亡的情况;免疫印迹法分析EV71诱导THP-1巨噬细胞自噬和凋亡相关蛋白水平的变化;用3-MA和Ac-DEVD-CHO抑制剂分别检测EV71对THP-1巨噬细胞自噬和凋亡的影响。结果 EV71作用THP-1巨噬细胞2、8和16h的细胞存活率逐渐下降(P<0.05);细胞内病毒核酸拷贝数逐渐增多(P<0.01);可见细胞内自噬小体和病毒颗粒;总细胞凋亡率逐渐增加(P<0.01);与对照组比较,EV71处理组LC3转化量(LC3-II/LC3-I)逐渐增多,而p62蛋白逐渐减少,cleaved caspase 3蛋白增多,Bcl-2和caspase-3蛋白减少(P<0.01),而cleaved caspase-8无差异(P>0.05);与PBS对比,在8 h时3-MA明显抑制EV71诱导THP-1巨噬细胞自噬,LC3-II/LC3-I比值减少,而p62蛋白增多(P<0.01);与DMSO对比,Ac-DEVD-CHO明显抑制EV71诱导THP-1巨噬细胞凋亡,凋亡率分别为15.5%和7.7%(P<0.01)。结论 EV71能感染THP-1巨噬细胞并在其中复制,且能诱导自噬和凋亡,其可能与激活LC3/p62自噬途径和caspase凋亡途径有关。

• 单位
  广东医科大学附属医院