化学计量学结合三维荧光快速定量检测异硫氰酸荧光素标记的人血清白蛋白

作者：董明月; 吴海龙; 龙婉君; 俞汝勤

来源：2019中国化学会第十五届全国计算（机）化学学术会议, 中国上海, 2019-11-14.

DOI：10.26914/c.cnkihy.2019.086192

• 化学计量学
• 三维校正
• 白蛋白
• 异硫氰酸荧光素

蛋白质是构成生物体的具有生物活性的高聚物分子,是生物体系生命现象的表现者。人血清白蛋白是人血中的一种重要组分,主要起维持血液的正常渗透压和输送亲水分子的作用,此外白蛋白还有解毒、参与脂类代谢及血浆中微溶物质的运输、维持血液酸碱平衡等作用,在医学临床及生物领域有着广泛的应用,故对白蛋白的定量检测非常其重要。近年来发现,某些荧光染料在与蛋白质作用后,荧光强度显著增大,而且荧光强度的增大与溶液中蛋白质的浓度呈线性关系,所以可以用该种方法来对蛋白质进行定量检测,异硫氰酸荧光素(FITC)便是其中一种染料。在碱性条件下,FITC中的异硫氰基可直接与蛋白质分子中的自由氨基经碳酰化反应形成硫碳氨基键,称为荧光蛋白标记。文献中报道对FITC标记的人血清白蛋白的检测,在标记完成之后需要用透析法或sephadex-G50凝胶层析来除去游离的FITC,以防止FITC自身的荧光对标记的蛋白荧光检测有影响。化学计量学中的二阶校正方法,对有干扰体系的快速定量检测具有很好的效果。考虑到人血清白蛋白定量检测前期处理的复杂性,本文提出一种利用"数学分离"来代替"化学分离"的二阶校正方法,无需对游离的FITC进行剔除,在有干扰荧光的情况下,对异硫氰酸荧光素标记的人血白蛋白进行快速定量分析。

• 单位
  湖南大学; 化学化工学院; 化学生物传感与计量学国家重点实验室