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摘要
目的：利用网络药理学筛选通络糖泰方（TLTT）治疗糖尿病周围神经病变（DPN）的活性成分，预测作用靶点及信号通路，探讨其作用机制。方法：采用中药系统药理学分析平台（TCMSP）收集TLTT的主要化学成分及作用靶点；利用基因卡片（Genecards）数据库检索与DPN相关的蛋白；利用STRING数据库和网络可视化软件Cytoscape3.9. 1构建蛋白-蛋白互作（PPI）网络；通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）和分子对接技术对靶点进行通路富集分析及成分-靶点对接。将30只SD大鼠随机分为对照组、弥可保组和TLTT组，每组10只，给予弥可保和TLTT灌胃制备含药血清；复苏1株RSC96雪旺细胞，设置对照组、高糖模型组、弥可保组和TLTT组，采用细胞计数检测法观察各组细胞存活率，Western blotting法检测各组细胞中丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)和抑癌基因TP53蛋白表达水平。结果：TLTT治疗DPN的有效化合物成分95个，463个靶点，DPN相关蛋白1 187个，137个药物-疾病共同靶点；基因本体论（GO）分析中生物过程、细胞组成和分子功能分别得到5 505个、466个和791个结果；KEGG分析得到253个结果，提示TLTT可能通过调节磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K-Akt)信号通路、液体剪切应力和动脉粥样硬化、晚期糖基化终末产物及其受体（AGE-RAGE）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信号通路发挥治疗作用；分子对接分析，TLTT通过槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇、山柰酚和常春藤皂苷元等核心成分，作用于AKT1、TP53、肿瘤坏死因子（TNF）和表皮生长因子受体（EGFR）等核心靶点。CCK-8法检测，与对照组比较，高糖模型组细胞存活率明显降低（P<0.05）；与高糖模型组比较，TLTT组细胞存活率明显升高（P<0.05）。Western blotting法，与对照组比较，高糖模型组细胞中AKT1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）, TP53蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与高糖模型组比较，TLTT组细胞中AKT1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）, TP53蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：TLTT的主要活性成分槲皮素等可能通过靶向PI3K-Akt等信号通路，促进雪旺细胞存活，升高AKT1蛋白和降低TP53蛋白表达水平，进而发挥治疗DPN的作用。
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单位成都中医药大学; 成都中医药大学附属医院
