摘要
目的 探讨婆罗双树样基因4(SALL4)对人卵巢癌SKOV-3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能机制。方法 通过SALL4短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染构建稳定低表达SALL4基因的SKOV-3细胞株,分为对照组(blank)、载体组(NC shRNA)和干扰组(SALL4 shRNA);采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞SALL4 mRNA和蛋白的表达水平。15只雄性BALB/c裸鼠按随机数字法分成3组,每组5只。将各组细胞经右前肢皮下注射建立裸鼠皮下移植瘤模型,根据注射的细胞类别将裸鼠分为对照组(blank,注射SKOV-3细胞)、载体组(NC shRNA,注射NC shRNA干预的SKOV-3细胞)和干扰组(SALL4 shRNA,注射SALL4 shRNA干预的SKOV-3细胞);监测肿瘤生长情况,并绘制肿瘤生长曲线;采用qRT-PCR法检测各组裸鼠移植瘤组织中SALL4 mRNA的表达水平;TUNEL染色观察各组裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡情况;免疫组化法观察移植瘤组织中Ki-67的表达水平;蛋白质印迹法检测各组移植瘤组织中SALL4蛋白、凋亡蛋白cleaved caspase-3以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达水平。结果 SALL4 shRNA慢病毒感染后,SKOV-3细胞中SALL4 mRNA和蛋白表达水平降低,差异有统计学意义,F_(mRNA)=370.032,F_(蛋白)=81.414,均P<0.001。与对照组[(2.13±0.17) g、(1 162.00±62.42) mm~3]和载体组[(1.98±0.25) g、(1 020.00±69.28) mm~3]比较,SALL4干扰组[(0.77±0.11) g、(560.40±70.77) mm~3]移植瘤质量和体积均降低,差异有统计学意义,F_(瘤质量)=80.584,F_(体积)=33.271,均P<0.001;同时,与对照组[(11.58±1.73)%、0.08±0.04]和载体组[(14.62±1.36)%、0.07±0.08]比较,SALL4干扰组[(56.84±4.48)%、0.87±0.12]移植瘤组织细胞凋亡率以及cleaved caspase-3蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(F值分别为254.180、759.081,均P<0.001),而与对照组[(78.66±2.21)%、0.89±0.06、0.20±0.05、0.24±0.04]和载体组[(74.82±3.07)%、0.82±0.08、0.19±0.02、0.22±0.05]比较,SALL4干扰组[(17.15±0.82)%、0.31±0.04、0.07±0.01、0.08±0.02]移植瘤中Ki-67蛋白阳性率以及β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白表达水平降低,差异有统计学意义,F值分别为476.086、616.622、67.286和106.588,均P<0.001。结论 干扰SALL4表达可有效抑制人卵巢癌SKOV-3细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活性有关。
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单位衡阳市妇幼保健院; 南华大学附属南华医院; 南华大学附属第二医院