基因工程技术制备和鉴定抗TNF-α蛋白Fab抗体(英文)

作者：李常颖; 李宏杰; 张婷; 畅继武

来源：中国现代医学杂志, 2009, (14): 2081-2084.

• 噬菌体抗体库
• Fab
• TNF-&alpha
• 制备
• 鉴定

目的利用基因工程技术制备人源性抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的可溶性Fab抗体,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果成功筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47kD的条带;Westernblot分析证实表达的蛋白即Fab抗体。ELISA筛选出2株抗体(TA-04,TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应。结论成功表达并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体,构建了一种基因工程抗体的有效制备途径,为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础。

• 单位
  华北理工大学; 天津医科大学第二医院