广西莪术SSR-PCR反应体系优化和引物筛选研究

作者：杨妮; 苏伟敏; 靳雅慧; 王建

来源：湖北农业科学, 2016, 55(23): 6271-6275.

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.23.067

• 广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang)
• SSR
• PCR反应体系优化
• 引物筛选

以广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang)嫩叶为材料,采用单因素和正交试验设计建立和优化SSR-PCR反应体系和反应程序,对最适宜退火温度(Tm)进行筛选优化,对17对已公布的姜黄属通用性引物进行扩增试验,筛选出多态性好、条带清晰的引物。结果表明,建立了适合广西莪术SSR分析的反应体系和扩增程序,即在15μL体系中,DNA模板为30 ng/μL,3μL,Mix(包含DNTP、Mg2+、1×buffer、Taq酶)为5μL,dd H2O为6μL,引物为各0.5μL时,分析效果较好,扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性30 s,根据不同引物的退火温度复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;最后72℃延伸5 min;反应结束后,4℃保存。同时筛选出在试验材料中能产生较清晰主带的引物共12对,初步验证了应用SSR分子标记分析在广西莪术遗传多样性的可行性。

• 单位
  柳州市妇幼保健院; 广西中医药大学